A kemény euroszkeptikus Szabadság és Közvetlen Demokrácia (Svoboda a přímá demokracie, SPD) – mely több belső harcot követően a japán származású Tomio Okamura vezetésével szakadt ki még 2015-ben a Hajnal – Nemzeti Koalíció (Úsvit – Národní Koalice) nevű pártból – ma az egyetlen olyan cseh párt, mely napirenden tartja a Csehország Európai Unióból való kilépéséről szervezett referendum kérdését. Emellett tagjai rendszeresen felszólalnak az „EU diktátumai” ellen, szoros kapcsolatban állnak a Marine Le Pen által fémjelzett Nemzeti Gyűlés pártjával, illetve EP-képviselőik a Le Pen-párt alapította Nemzetek és Szabadság Európája (Europe of Nations and Freedom, ENF) frakcióban foglalnak helyet.
Ugyanígy erős euroszkeptikus vonásokat hordoz magán Csehország és Morvaország Kommunista Pártja (Komunistická strana Čech a Moravy, KSČM) is, amely honlapján arról ír, hogy bár „az európai integráció folyamatát támogatja”, nincs ellene a mérsékelten föderalista megközelítéseknek, ugyanakkor a „jelenlegi formájában” az Európai Unióban való tagságot ellenzi. A párt az Európai Parlamentben az Egységes Európai Baloldal/Északi Zöld Baloldal (European United Left–Nordic Green Left, GUE/NGL) pártcsoportban ül.
A mérsékelt baloldali, szociáldemokrata Cseh Szociáldemokrata Párt (Česká strana sociálně demokratická, ČSSD) a Szocialisták és Demokraták Progresszív Szövetsége (Progressive Alliance of Socialists and Democrats, S&D) európai parlamenti frakciójának tagja. Az alakulat egyértelműen EU-párti beállítottságú, még akkor is, ha annak egyes irányelveit ellenzi is: az Európai Bizottság által javasolt, a menedékkérelmek EU-tagállamokban történő elbírálásáról szóló uniós döntéssel (mely „kvótarendszer” néven híresült el) például a ČSSD erőteljesen szembehelyezkedett. Bohuslav Sobotka miniszterelnök emellett a cseh emberi jogi minisztérium éléről is elküldte a párt liberális szárnya vezetőjének számító ifjabb Jiří Dienstbiert. Végül maga Sobotka is lemondott a ČSSD vezetéséről, utódja pedig a volt belügyminiszter Milan Chovanec lett, aki az Európai Unió Csehországban népszerűtlen irányelveit kezdte támadni.